《刺客信条:兄弟会》紧接前作《刺客信条II》 ,酒保Desmond Miles与其余三名现代刺客(Lucy Stillman, Shuan Hastings, Rebecca Crane)在逃离跨国制药公司Abstergo(现代圣殿骑士团)的追击后到达意大利城市蒙特里久尼。以已荒废的Auditore庄园地下室作为新的藏身之所,Desmond再次使用基因记忆追溯机器“Animus 2.0”,再度进入其刺客祖先Ezio Auditore de Firenze的记忆。 1499年12月文艺复兴时期,40岁的Ezio于放弃刺杀教宗亚历山大六世Rodrigo Borgia(圣殿骑士团之首)后回到蒙特里久尼。1500年1月,教宗之子凯萨